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豚鼠白介素5ELISA检测试剂盒的检测方法
发布时间:2019-04-24   点击次数:94次
豚鼠白介素5ELISA检测试剂盒采用酶联的级联放大效应,较胶体金灵敏度更高。也正因此ELISA试剂盒检测的抗体数值可能比胶体金检测卡测出来的高些。
 
豚鼠白介素5ELISA检测试剂盒检测方法:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同。
(10)每孔加TMB显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl2mol/LH2SO4终止反应。
(12)分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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