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呋喃唑酮代谢物检测试剂盒具体操作步骤和结果分析
发布时间:2019-05-05   点击次数:51次

呋喃唑酮代谢物检测试剂盒具体操作步骤和结果分析

 

6 酶联免疫试验步骤

    将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

实验开始前,用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。

6.1 编    号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。

6.2 加样反应:加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应45分钟。

6.3 洗    涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。

6.4 显    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。

6.5 终    止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。

6.6 测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。

7 结果分析

7.1 百分吸光率的计算

    标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值

7.2 标准曲线的绘制与计算

    以标准液百分吸光率为纵坐标,对应的标准液浓度(ppb)的对数为横坐标,绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。

    若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的准确、快速分析。

8 注意事项

8.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致所有标准的OD值偏低。

8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

8.3 混合要均匀,洗板要彻底,在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。

8.5 不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

8.6 显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。

8.7 反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。

 

 

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